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治療白癜風復方中藥體外對蘑菇酪氨酸酶活性的作用

臨床皮膚科雜志2000年第3期第29卷臨床及實驗研究

作者：李洪武朱文元

單位：南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院皮膚科，210029

關鍵詞：白癜風；復方中藥；酪氨酸酶

摘要：為了研究復方中藥對酪氨酸酶活性的影響，篩選有作用的中藥方劑，為中藥治療白癜風提供實驗依據(jù)。通過計算機排序選定應用頻次較高的治療白癜風中藥復方5首，應用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法體外測定酪氨酸酶活性。結果白駁片、白癜風丸、柴胡疏肝湯、白蝕丸組酪氨酸酶活性增高(P＜0.01)，白癜風丸組方中藥補骨脂、當歸、地膚子、刺蒺藜對酪氨酸酶活性均有激活作用，其中補骨脂較高，刺蒺藜次之，當歸、地膚子較弱。提示白駁片、白癜風丸、柴胡疏肝湯、白蝕丸可使酪氨酸酶活性增高；白癜風丸組方中藥補骨脂、當歸、地膚子、刺蒺藜對酪氨酸酶活性有激活作用。

EffectsoftraditionalChinesemedicinecompoundsfortreatingvitiligoonmushroomtyrosinaseactivityinvitro

LiHongwuZhuWenyuan

(DepartmentofDermatology,TheFirstAffiliatedHospital,NanjingMedicalUniversity,Nanjing,210029)

AbstractInordertoinvestigatetheeffectoftraditionalChinesemedicines(TCMs)ontyrosinaseactivityandprovideexperimentalevidencefortreatingvitiligo,tyrosinaseactivitywasestimatedbymeasuringtherateofoxidationofDLdopa.ThefindingsshowedthatthetyrosinaseactivityincreasedindeterminingVitilitoWan,BaiboPian,ChaihuShuganTangandBaishiWan(P＜0.01).WhileVitiligoWancomponentsweretested,theyallcouldactivatethetyrosinase,andinorderoftyrosinaseactivitylevelincreasedtheywerePsoraleacorylifoliaL.(補骨脂),TribulusterrestrisL.(刺蒺藜),Angelicasinensis(Oliv.)Diels(當歸)andKochiascoparia(L.)Schrad(地膚子).ThesedatarevealedthatthelevelsoftyrosinaseactivitywereinducedbyBaiboPian,VitiligoWan,ChaihuShuganTang,BaishiWan,andVitiligoWancomponents.

KeywordsVitiligoTraditionalChinesemedicinescompoundTyrosinase

酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)是皮膚黑素生物合成的主要限速酶，其化學結構為銅結合糖蛋白。在皮膚黑素生物合成過程中，酪氨酸羥化生成多巴，多巴氧化生成多巴醌，二羥基吲哚轉化生成吲哚醌，這些反應步驟均需TYR參與；無TYR時，反應則變得非常緩慢[1]。TYR活性與黑素合成量呈正相關[2]，TYR活性改變可引起色素障礙性皮膚病如白癜風，基因突變則可引起白化病[3,4]。為了研究中藥對酪氨酸酶活性的作用，我們選擇100冊古籍專著和50種中醫(yī)藥雜志近30年文獻，電腦統(tǒng)計選定古方中治療白癜風應用頻次較高的復方中藥5首[5]，分別測定其水提液、醇提液對酪氨酸酶活性的影響。

1材料和方法

1.1儀器

722分光光度計(上海第三分析儀器廠生產(chǎn))。

1.2試劑

蘑菇酪氨酸酶(tyrosinase.EC.1.14.18.),DL多巴(DL－β－3,4－dopa)，均購自美國Sigma公司)，其它試劑均為分析純。

1.3藥物

1.3.1藥物來源：治療白癜風中藥復方白駁片、白癜風丸、柴胡疏肝湯、通竅活血湯、白蝕丸由南京中醫(yī)藥大學門診部提供，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室王春根教授鑒定，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定。

1.3.2方藥組成：白駁片：紫草、降香、重樓、白藥子、白薇、蒼術、海螵蛸、紅花、桃仁、生首烏、龍膽草、白蒺藜、甘草。白癜風丸：補骨脂、當歸、地膚子、刺蒺藜。通竅活血湯：赤芍、川芎、桃仁、紅花、鮮姜、老蔥白、紅棗、麝香。柴胡疏肝湯：川芎、當歸、赤芍、生地、柴胡、黃芩、山梔子、天花粉、防風、牛蒂子、連翹、甘草。白蝕丸：紅花、丹皮、紫草、蒼術、白蒺藜、龍膽草、甘草、補骨脂、首烏、丹參、靈芝。

1.3.3中藥制備方法：(1)醇提液：中藥粉碎后用90％乙醇溶液浸泡，3h后回流過濾，再將殘渣提取2次，合并提取液，置沸水浴中揮盡乙醇濃縮至膏稠狀，然后溶于含2％DMSO0.05mol/LpH6.5磷酸緩沖液中，制成每mL相當于0.1g原生藥的溶液。(2)水提液：取中藥置玻璃燒杯內(nèi)，加相當于藥材量5～7倍的蒸餾水浸泡1～2h，煮沸30min過濾。藥渣加3～5倍量水繼續(xù)煎煮，煮沸20min，過濾。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成每mL相當于原藥材0.1g的藥液。若處方中有需先煎、后下、包煎、另煎和烊化等藥材，則按常規(guī)處理。

1.4實驗方法

1.4.1酪氨酸酶活性測定方法：采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法檢測酪氨酸酶活性。反應混合物2mL：0.1mol/LpH6.5PBS1.8mL＋藥物0.1mL(濃度0.1g/mL)＋蘑菇酪氨酸酶0.1mL(80U)。37℃孵育10min，加0.15％DL多巴1mL,2、3、4、5、6min時，用分光光度計475nm處測定吸光度A值(A475)，以每分鐘A475增加0.001定為1個酶活力單位。醇提物用DMSO助溶。以PBS液為空白，水提液以不加藥物的反應組為對照，醇提液以不加藥物含2％DMSO的反應組為對照，分別測定酪氨酸酶活性。

1.4.2數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法：上述每一實驗重復3次。所測實驗數(shù)據(jù)以(χ±s)表示，采用成組t檢驗，使用Office97excel軟件作數(shù)據(jù)處理及分析。

2結果

2.1治療白癜風中藥復方對酪氨酸酶活性的影響：治療白癜風中藥復方中，白癜風丸、柴胡疏肝湯、白駁片、白蝕丸組酪氨酸酶活性增高(P＜0.01)。其中，白癜風丸對酪氨酸酶活性的激活作用最強，柴胡疏肝湯、白駁片次之，白蝕丸較弱，結果見表1。

表1白癜風中藥復方對蘑菇酪氨酸酶活性(吸光度A475)的作用(±s)

組別水提物醇提物對照組0.1676±0.0687590.1438±0.049706白駁片0.3130±0.008124＊0.3232±0.077196＊白癜風丸0.5178±0.011454＊0.6272±0.093369＊通竅活血湯0.1156±0.005413＊＊＊0.1296±0.010922＊＊＊柴胡疏肝湯0.3314±0.017111＊0.5232±0.001304＊白蝕丸0.2522±0.009985＊＊0.2336±0.013740＊n=18,與對照組相比＊P＜0.01，＊＊P＜0.05，＊＊＊P＞0.05

2.2白癜風丸組方中藥對蘑菇酪氨酸酶活性的影響：白癜風丸組方中藥補骨脂、當歸、地膚子、刺蒺藜對酪氨酸酶活性均有激活作用，其中補骨脂較高，刺蒺藜次之，當歸、地膚子較弱，結果見表2。

表2白癜風丸組方中藥對蘑菇酪氨酸酶活性(吸光度A475)的作用(±s)

組別水提物醇提物對照組0.1688±0.0467610.1476±0.035460補骨脂0.4342±0.052101＊0.4762±0.036218＊當歸0.1838±0.048610＊＊0.1868±0.030485＊地膚子0.1814±0.041205＊＊0.2286±0.035376＊刺蒺藜0.2544±0.070718＊0.3054±0.060724＊n=18,與對照組相比＊P＜0.01＊＊P＜0.05

3討論

業(yè)已證實上調(diào)酪氨酸酶活性加速黑素生成的藥物可提高白癜風治療效果，但其機制不清。Cui等認為毛囊外根鞘部存在無功能黑素細胞(MC)，以毛囊中下部居多[6,7]。白癜風表皮內(nèi)MC完全消失，毛囊球部和漏斗部有色素MC被破壞，但毛囊外根鞘內(nèi)無功能MC存在，其數(shù)量和分布與正常相近。白癜風恢復時，表皮內(nèi)出現(xiàn)新生有功能MC，毛囊外根鞘內(nèi)無功能MC較正常和白癜風時明顯增多，而且出現(xiàn)了有功能MC?；謴瓦^程首先開始于毛囊中下部。藥物可能刺激外根鞘內(nèi)無功能MC。使其分裂增殖，并沿毛囊外根鞘表面向上移行，進入表皮。在其移行過程中，MC功能和形態(tài)逐漸成熟，多巴反應由弱到強，分支增多延長。進入表皮后，MC以毛囊孔為中心繼續(xù)向周圍擴展，形成臨床上所見的毛囊孔性色素小島。

中藥復方是中醫(yī)臨床防病治病的主要形式，是中醫(yī)扶正祛邪、辨證論治的集中體現(xiàn)和中醫(yī)治法治則在組方用藥上的具體應用。我們選取白癜風治療中使用頻次較高的復方中藥5首，分別測定其水提液、醇提液對酪氨酸酶活性的影響。結果顯示白癜風丸、柴胡疏肝湯、白駁片、白蝕丸組酪氨酸酶活性增高(P＜0.01)。提示白癜風丸等治療白癜風中藥復方對酪氨酸酶活性有顯著激活作用。白癜風丸行血活血、散風解毒、祛風除斑，可使酪氨酸酶活性顯著增高，是中醫(yī)治療白癜風主要復方。實驗中發(fā)現(xiàn)，其組方中藥補骨脂、當歸、地膚子、刺蒺藜均上調(diào)酪氨酸酶活性且能發(fā)揮協(xié)同作用；從中醫(yī)組方原則來看，當歸補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸；刺蒺藜平肝舒郁、祛風活血、疏肝理氣；地膚子清熱利濕祛風；補骨脂滋肝補骨助陽。諸藥配伍，補中有通，益中有泄，共奏調(diào)和氣血、榮膚祛白之功效。

司在和等應用白癜風丸治療白癜風患者，每日2次，每次6～9g，療程9個月，共100例，痊愈38例，顯效25例，有效18例，無效19例。馮所安等應用白蝕丸口服，每日3次，每次10粒，療程3月，共治療458例白癜風患者，顯效61例，有效264例，無效133例，總有效率70.90％。王專勤等應用白駁片治療白癜風患者79例，痊愈37例，顯效17例，有效12例，無效13例。白癜風丸、白駁片、白蝕丸等主要由滋補、性溫、活血、化淤的中藥組成，組方中補骨脂、刺蒺藜、降香、丹皮、丹參等均可使酪氨酸酶活性增高[8，9]。我們的實驗結果提示白癜風丸、白駁片等中藥復方對酪氨酸酶有顯著激活作用，因此，在治療白癜風可優(yōu)先考慮選用。

(南京中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室王春根教授給予中藥鑒定，特此致謝)

國家自然科學基金資助課題(No.39570658)

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(收稿1999－04－05修回1999－08－20)

（責任編輯：zxwq）