治療白癜風(fēng)復(fù)方中藥體外對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性的作用

治療白癜風(fēng)復(fù)方中藥體外對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性的作用

臨床皮膚科雜志2000年第3期第29卷臨床及實(shí)驗(yàn)研究

作者：李洪武朱文元

單位：南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科，210029

關(guān)鍵詞：白癜風(fēng)；復(fù)方中藥；酪氨酸酶

摘要：為了研究復(fù)方中藥對(duì)酪氨酸酶活性的影響，篩選有作用的中藥方劑，為中藥治療白癜風(fēng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。通過(guò)計(jì)算機(jī)排序選定應(yīng)用頻次較高的治療白癜風(fēng)中藥復(fù)方5首，應(yīng)用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法體外測(cè)定酪氨酸酶活性。結(jié)果白駁片、白癜風(fēng)丸、柴胡疏肝湯、白蝕丸組酪氨酸酶活性增高(p＜0.01)，白癜風(fēng)丸組方中藥補(bǔ)骨脂、當(dāng)歸、地膚子、刺蒺藜對(duì)酪氨酸酶活性均有激活作用，其中補(bǔ)骨脂較高，刺蒺藜次之，當(dāng)歸、地膚子較弱。提示白駁片、白癜風(fēng)丸、柴胡疏肝湯、白蝕丸可使酪氨酸酶活性增高；白癜風(fēng)丸組方中藥補(bǔ)骨脂、當(dāng)歸、地膚子、刺蒺藜對(duì)酪氨酸酶活性有激活作用。

effectsoftraditionalchinesemedicinecompoundsfortreatingvitiligoonmushroomtyrosinaseactivityinvitro

lihongwuzhuwenyuan

(departmentofdermatology,thefirstaffiliatedhospital,nanjingmedicaluniversity,nanjing,210029)

abstractinordertoinvestigatetheeffectoftraditionalchinesemedicines(tcms)ontyrosinaseactivityandprovideexperimentalevidencefortreatingvitiligo,tyrosinaseactivitywasestimatedbymeasuringtherateofoxidationofdldopa.thefindingsshowedthatthetyrosinaseactivityincreasedindeterminingvitilitowan,baibopian,chaihushugantangandbaishiwan(p＜0.01).whilevitiligowancomponentsweretested,theyallcouldactivatethetyrosinase,andinorderoftyrosinaseactivitylevelincreasedtheywerepsoraleacorylifolial.(補(bǔ)骨脂),tribulusterrestrisl.(刺蒺藜),angelicasinensis(oliv.)diels(當(dāng)歸)andkochiascoparia(l.)schrad(地膚子).thesedatarevealedthatthelevelsoftyrosinaseactivitywereinducedbybaibopian,vitiligowan,chaihushugantang,baishiwan,andvitiligowancomponents.

keywordsvitiligotraditionalchinesemedicinescompoundtyrosinase

酪氨酸酶(tyrosinase,tyr)是皮膚黑素生物合成的主要限速酶，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為銅結(jié)合糖蛋白。在皮膚黑素生物合成過(guò)程中，酪氨酸羥化生成多巴，多巴氧化生成多巴醌，二羥基吲哚轉(zhuǎn)化生成吲哚醌，這些反應(yīng)步驟均需tyr參與；無(wú)tyr時(shí)，反應(yīng)則變得非常緩慢[1]。tyr活性與黑素合成量呈正相關(guān)[2]，tyr活性改變可引起色素障礙性皮膚病如白癜風(fēng)，基因突變則可引起白化病[3,4]。為了研究中藥對(duì)酪氨酸酶活性的作用，我們選擇100冊(cè)古籍專著和50種中醫(yī)藥雜志近30年文獻(xiàn)，電腦統(tǒng)計(jì)選定古方中治療白癜風(fēng)應(yīng)用頻次較高的復(fù)方中藥5首[5]，分別測(cè)定其水提液、醇提液對(duì)酪氨酸酶活性的影響。

1材料和方法

1.1儀器

722分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠生產(chǎn))。

1.2試劑

蘑菇酪氨酸酶(tyrosinase.ec.1.14.18.),dl多巴(dl－β－3,4－dopa)，均購(gòu)自美國(guó)sigma公司)，其它試劑均為分析純。

1.3藥物

1.3.1藥物來(lái)源：治療白癜風(fēng)中藥復(fù)方白駁片、白癜風(fēng)丸、柴胡疏肝湯、通竅活血湯、白蝕丸由南京中醫(yī)藥大學(xué)門診部提供，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室王春根教授鑒定，符合《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定。

1.3.2方藥組成：白駁片：紫草、降香、重樓、白藥子、白薇、蒼術(shù)、海螵蛸、紅花、桃仁、生首烏、龍膽草、白蒺藜、甘草。白癜風(fēng)丸：補(bǔ)骨脂、當(dāng)歸、地膚子、刺蒺藜。通竅活血湯：赤芍、川芎、桃仁、紅花、鮮姜、老蔥白、紅棗、麝香。柴胡疏肝湯：川芎、當(dāng)歸、赤芍、生地、柴胡、黃芩、山梔子、天花粉、防風(fēng)、牛蒂子、連翹、甘草。白蝕丸：紅花、丹皮、紫草、蒼術(shù)、白蒺藜、龍膽草、甘草、補(bǔ)骨脂、首烏、丹參、靈芝。

1.3.3中藥制備方法：(1)醇提液：中藥粉碎后用90％乙醇溶液浸泡，3h后回流過(guò)濾，再將殘?jiān)崛?次，合并提取液，置沸水浴中揮盡乙醇濃縮至膏稠狀，然后溶于含2％dmso0.05mol/lph6.5磷酸緩沖液中，制成每ml相當(dāng)于0.1g原生藥的溶液。(2)水提液：取中藥置玻璃燒杯內(nèi)，加相當(dāng)于藥材量5～7倍的蒸餾水浸泡1～2h，煮沸30min過(guò)濾。藥渣加3～5倍量水繼續(xù)煎煮，煮沸20min，過(guò)濾。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成每ml相當(dāng)于原藥材0.1g的藥液。若處方中有需先煎、后下、包煎、另煎和烊化等藥材，則按常規(guī)處理。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1酪氨酸酶活性測(cè)定方法：采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法檢測(cè)酪氨酸酶活性。反應(yīng)混合物2ml：0.1mol/lph6.5pbs1.8ml＋藥物0.1ml(濃度0.1g/ml)＋蘑菇酪氨酸酶0.1ml(80u)。37℃孵育10min，加0.15％dl多巴1ml,2、3、4、5、6min時(shí)，用分光光度計(jì)475nm處測(cè)定吸光度a值(a475)，以每分鐘a475增加0.001定為1個(gè)酶活力單位。醇提物用dmso助溶。以pbs液為空白，水提液以不加藥物的反應(yīng)組為對(duì)照，醇提液以不加藥物含2％dmso的反應(yīng)組為對(duì)照，分別測(cè)定酪氨酸酶活性。

1.4.2數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)方法：上述每一實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。所測(cè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(χ±s)表示，采用成組t檢驗(yàn)，使用office97excel軟件作數(shù)據(jù)處理及分析。

2結(jié)果

2.1治療白癜風(fēng)中藥復(fù)方對(duì)酪氨酸酶活性的影響：治療白癜風(fēng)中藥復(fù)方中，白癜風(fēng)丸、柴胡疏肝湯、白駁片、白蝕丸組酪氨酸酶活性增高(p＜0.01)。其中，白癜風(fēng)丸對(duì)酪氨酸酶活性的激活作用最強(qiáng)，柴胡疏肝湯、白駁片次之，白蝕丸較弱，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1白癜風(fēng)中藥復(fù)方對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性(吸光度a475)的作用(±s)

組別水提物醇提物

對(duì)照組0.1676±0.0687590.1438±0.049706

白駁片0.3130±0.008124＊0.3232±0.077196＊

白癜風(fēng)丸0.5178±0.011454＊0.6272±0.093369＊

通竅活血湯0.1156±0.005413＊＊＊0.1296±0.010922＊＊＊

柴胡疏肝湯0.3314±0.017111＊0.5232±0.001304＊

白蝕丸0.2522±0.009985＊＊0.2336±0.013740＊

n=18,與對(duì)照組相比＊p＜0.01，＊＊p＜0.05，＊＊＊p＞0.05

2.2白癜風(fēng)丸組方中藥對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性的影響：白癜風(fēng)丸組方中藥補(bǔ)骨脂、當(dāng)歸、地膚子、刺蒺藜對(duì)酪氨酸酶活性均有激活作用，其中補(bǔ)骨脂較高，刺蒺藜次之，當(dāng)歸、地膚子較弱，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2白癜風(fēng)丸組方中藥對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性(吸光度a475)的作用(±s)

組別水提物醇提物

對(duì)照組0.1688±0.0467610.1476±0.035460

補(bǔ)骨脂0.4342±0.052101＊0.4762±0.036218＊

當(dāng)歸0.1838±0.048610＊＊0.1868±0.030485＊

地膚子0.1814±0.041205＊＊0.2286±0.035376＊

刺蒺藜0.2544±0.070718＊0.3054±0.060724＊

n=18,與對(duì)照組相比＊p＜0.01＊＊p＜0.05

3討論

業(yè)已證實(shí)上調(diào)酪氨酸酶活性加速黑素生成的藥物可提高白癜風(fēng)治療效果，但其機(jī)制不清。cui等認(rèn)為毛囊外根鞘部存在無(wú)功能黑素細(xì)胞(mc)，以毛囊中下部居多[6,7]。白癜風(fēng)表皮內(nèi)mc完全消失，毛囊球部和漏斗部有色素mc被破壞，但毛囊外根鞘內(nèi)無(wú)功能mc存在，其數(shù)量和分布與正常相近。白癜風(fēng)恢復(fù)時(shí)，表皮內(nèi)出現(xiàn)新生有功能mc，毛囊外根鞘內(nèi)無(wú)功能mc較正常和白癜風(fēng)時(shí)明顯增多，而且出現(xiàn)了有功能mc。恢復(fù)過(guò)程首先開(kāi)始于毛囊中下部。藥物可能刺激外根鞘內(nèi)無(wú)功能mc。使其分裂增殖，并沿毛囊外根鞘表面向上移行，進(jìn)入表皮。在其移行過(guò)程中，mc功能和形態(tài)逐漸成熟，多巴反應(yīng)由弱到強(qiáng)，分支增多延長(zhǎng)。進(jìn)入表皮后，mc以毛囊孔為中心繼續(xù)向周圍擴(kuò)展，形成臨床上所見(jiàn)的毛囊孔性色素小島。

中藥復(fù)方是中醫(yī)臨床防病治病的主要形式，是中醫(yī)扶正祛邪、辨證論治的集中體現(xiàn)和中醫(yī)治法治則在組方用藥上的具體應(yīng)用。我們選取白癜風(fēng)治療中使用頻次較高的復(fù)方中藥5首，分別測(cè)定其水提液、醇提液對(duì)酪氨酸酶活性的影響。結(jié)果顯示白癜風(fēng)丸、柴胡疏肝湯、白駁片、白蝕丸組酪氨酸酶活性增高(p＜0.01)。提示白癜風(fēng)丸等治療白癜風(fēng)中藥復(fù)方對(duì)酪氨酸酶活性有顯著激活作用。白癜風(fēng)丸行血活血、散風(fēng)解毒、祛風(fēng)除斑，可使酪氨酸酶活性顯著增高，是中醫(yī)治療白癜風(fēng)主要復(fù)方。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，其組方中藥補(bǔ)骨脂、當(dāng)歸、地膚子、刺蒺藜均上調(diào)酪氨酸酶活性且能發(fā)揮協(xié)同作用；從中醫(yī)組方原則來(lái)看，當(dāng)歸補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)燥滑腸；刺蒺藜平肝舒郁、祛風(fēng)活血、疏肝理氣；地膚子清熱利濕祛風(fēng)；補(bǔ)骨脂滋肝補(bǔ)骨助陽(yáng)。諸藥配伍，補(bǔ)中有通，益中有泄，共奏調(diào)和氣血、榮膚祛白之功效。

司在和等應(yīng)用白癜風(fēng)丸治療白癜風(fēng)患者，每日2次，每次6～9g，療程9個(gè)月，共100例，痊愈38例，顯效25例，有效18例，無(wú)效19例。馮所安等應(yīng)用白蝕丸口服，每日3次，每次10粒，療程3月，共治療458例白癜風(fēng)患者，顯效61例，有效264例，無(wú)效133例，總有效率70.90％。王專勤等應(yīng)用白駁片治療白癜風(fēng)患者79例，痊愈37例，顯效17例，有效12例，無(wú)效13例。白癜風(fēng)丸、白駁片、白蝕丸等主要由滋補(bǔ)、性溫、活血、化淤的中藥組成，組方中補(bǔ)骨脂、刺蒺藜、降香、丹皮、丹參等均可使酪氨酸酶活性增高[8，9]。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示白癜風(fēng)丸、白駁片等中藥復(fù)方對(duì)酪氨酸酶有顯著激活作用，因此，在治療白癜風(fēng)可優(yōu)先考慮選用。

(南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室王春根教授給予中藥鑒定，特此致謝)

國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題(no.39570658)

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(收稿1999－04－05修回1999－08－20)

（責(zé)任編輯：zxwq）